皮诺飞生物小鼠乳腺癌原位瘤模型服务的定义和实验方法的介绍：
一、 定义
小鼠乳腺癌原位瘤模型服务是指将人源或鼠源乳腺癌细胞/组织精准移植至小鼠乳腺脂肪垫内，模拟肿瘤在天然微环境（乳腺导管、脂肪组织、血管网络）中的生长、侵袭及转移过程，用于药物疗效评价、转移机制研究及新型疗法开发的临床前平台。该模型最大程度保留肿瘤-基质互作，较皮下模型更具临床预测价值。
二、 实验方法
1. 模型构建核心步骤
环节 | 标准化操作 |
动物选择 | - 免疫缺陷鼠（BALB/c nude、NSG）：人源细胞（MDA-MB-231、BT474）或PDX移植 |
手术暴露 | 麻醉小鼠（异氟烷），侧卧位切开第4/5对乳腺区域皮肤（1cm切口），暴露乳腺脂肪垫 |
原位接种 | - 细胞悬液：注射 5×10⁴–1×10⁵个荧光素酶标记细胞（体积20-30μL，含50% Matrigel®）至脂肪垫中心 |
对照组设置 | 假手术组（注射基质胶）、溶剂对照组、阳性药组（阿霉素3mg/kg或他莫昔芬10mg/kg） |
术后管理 | 缝合切口，镇痛（卡洛芬，5mg/kg），监测切口愈合 |
> 注：接种后7天IVIS成像验证成瘤（光子信号＞5×10³ p/s/cm²/sr），剔除未成模个体。
2. 药效评价体系
（1）原发瘤监测
|
肿瘤检测方法与指标表
方法 | 检测指标 | 频率 |
活体成像（IVIS） | 乳腺区域光子通量（p/s/cm²/sr） | 每周2次 |
游标卡尺测量 | 肿瘤体积 V=0.52×长×宽² | 每3天1次 |
超声成像（40MHz） | 肿瘤内部血流（Doppler）、坏死区占比 | 给药前/终点 |
（2）转移灶评价
- 自发转移：
- 处死后取肺、骨、脑进行离体成像，H&E染色定量转移灶数量
- 骨转移灶TRAP染色（破骨细胞活性）
- 分子标志物：
- 循环肿瘤细胞（CTC）检测：显微滤膜捕获EpCAM⁺细胞（>5μm）
- 血清ELISA：乳腺癌相关标志物（CA15-3、HER2-ECD）
（3）组织病理与微环境分析
检测技术与临床关联表
检测技术 | 靶标 | 临床关联 |
多色免疫荧光 | CK8（肿瘤细胞）/α-SMA（CAFs）/CD31（血管） | 肿瘤-基质共进化可视化 |
流式细胞术 | CD8⁺T细胞/PD-1⁺T细胞/TAMs（F4/80⁺CD206⁺） | 免疫微环境动态变化 |
空间转录组 | 肿瘤侵袭前沿基因表达谱 | 转移驱动机制挖掘 |
3. 特色模型扩展
肿瘤模型应用场景及技术要点表
模型类型 | 应用场景 | 技术要点 |
三阴性乳腺癌模型 | 评价PD-1/PARP抑制剂疗效 | MDA-MB-231原位移植（NSG小鼠） |
HER2⁺靶向治疗模型 | 抗体偶联药物（ADC）药效验证 | BT474原位瘤+曲妥珠单抗对照 |
耐药模型 | 紫杉醇耐药株（MCF-7/TXR）药敏测试 | 低剂量诱导传代保留耐药特性 |
人源化免疫模型 | 免疫疗法评价 | NSG-SGM3小鼠+人PBMC重建免疫系统 |
四、 标准化服务流程
```mermaid
graph TB
A[细胞系/PDX组织激活] --> B[小鼠乳腺脂肪垫原位接种]
B --> C[活体成像验证成瘤]
C --> D[随机分组给药]
D --> E[动态监测原发/转移灶]
E --> F[终末多器官取材]
F --> G[分子病理+微环境分析]
G --> H[数据整合报告]
```
交付成果：
- 原发瘤生长曲线（体积+IVIS光子值双指标）
- 转移热图（肺/骨/脑离体成像）
- 免疫微环境流式图谱（T细胞/巨噬细胞分型）
- 药效统计表：
治疗效果对比表
组别 | TGI(%) | 肺转移抑制率(%) | 中位生存期(天) |
对照组 | - | - | 28 |
治疗组 | 72.3 | 85.6 | 42 |
> 注：
> - 质量控制：溶剂对照组原位成瘤率≥90%，阳性药组TGI>50%
> - 伦理合规：AAALAC认证（协议号：IACUC-2025-BR01），支持IND申报
> - 周期：基础实验28天（含转移监测），PDX模型延长至6周
核心应用：
靶向药物敏感性筛查｜免疫检查点抑制剂联用方案｜抗体偶联药物（ADC）疗效验证｜局部缓释制剂评价
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