线粒体膜电位检测（TMRE法）｜实验操作全指南

线粒体膜电位(ΔΨm)是衡量线粒体功能的核心指标，其变化与细胞凋亡、氧化应激、药物损伤等密切相关。TMRE法因细胞毒性低、检测灵敏，成为科研中常用的线粒体膜电位检测方法。

一、实验原理

TMRE（四甲基罗丹明乙酯）是可透过细胞膜的阳离子荧光探针，能选择性富集于有活性的线粒体中，其荧光强度与线粒体膜电位呈正相关：

• 膜电位越高 → TMRE积累越多 → 红色荧光信号越强

• 膜电位降低 → TMRE释放至胞质 → 荧光信号减弱/消失

二、仪器与试剂

仪器设备

荧光显微镜共聚焦显微镜流式细胞仪CO₂培养箱

实验试剂

TMRE试剂(1000×)、Hoechst 33342、PBS、胰蛋白酶、培养基

三、实验步骤

3.1 细胞接种

对数生长期细胞接种24h，贴壁备用。

3.2 细胞干预

对照组正常培养；模型组加10μM CCCP孵育30min。

3.3 染液配制

• TMRE工作液：1μL原液+1mL缓冲液

• Hoechst工作液：PBS稀释至1μg/mL

3.4 染色（避光操作！）

1. PBS洗细胞1-2次

2. 加TMRE，37℃孵育30min

3. 洗涤后加Hoechst孵育10min

4. PBS洗涤备用

3.5 荧光/流式检测

显微镜观察红色荧光；流式细胞仪定量分析。

四、实验结果判断

• 正常细胞：明亮橘红色荧光

• 膜电位下降细胞：橘红色荧光显著减弱，流式直方图明显左移。

⚠️ 实验注意事项

1. 全程避光，防止荧光淬灭

2. 选用70-80%融合度的对数生长期细胞

3. 仅活细胞检测，不可固定

4. 无血清染色，提升效果

实验顺利～